黃曲霉毒素的檢測方法
1.生物鑒定法 其特點是待檢樣品不需很純，主要用于定性，共有10種:（1）抑菌試驗;（2）對微生物遺傳因子影響試驗;（3）細菌發(fā)光試驗;（4）熒光反應;（5）組織培養(yǎng)檢測法;（6）雞胚試驗;（7）鴨胚試驗;（8）鱒魚試驗;（9）植物試驗;（10）飼喂實驗動物試驗。生物鑒定法是利用AFT能影響微生物、水生動物、家禽等生物體的細胞代謝，來鑒定AFT的存在。其方法專一性差，靈敏度低，一般只作為化學分析法的佐證。
2.化學分析法 zui常用的為薄層層析法（TLC），適用于糧食及其制品、調(diào)味品等AFB 1 的檢測，主要是半定量。利用AFB 1 具有熒光性的特點，提取和濃縮樣品中的AFB 1 ，用單向或雙向展開法在薄層上分離后，在365nm紫外光照射下產(chǎn)生藍紫色熒光，根據(jù)在薄層上顯示熒光的zui低檢出量定量，其靈敏度為5μg/kg。由于薄層層析法測定AFB 1 不是很專一，因此樣品中其他熒光物質(zhì)的干擾造成測定誤差。可以用以下方法進行確定:一是用多種溶劑系統(tǒng)展開，可將AFB 1 、G 1 及各種AFT類似物分開;二是采用層析斑點的化學試驗，將樣品提取物用甲酸亞硫酰氨或三氟醋酸處理，用衍生化的方法將AFB 1 與其類似物分開;三是層析斑點的物理試驗，可根據(jù)紫外吸收光譜，紅外吸收光譜和熒光屏光譜的差別，將非黃曲霉毒素和AFT分開。
3.儀器分析法 液相色譜法（HPLC）是20世紀70年代初發(fā)展起來的一種以液體為流行相的新型色譜技術。是分離分析各種AFT的好方法，如配以熒光檢測器，則該法具有靈敏度高、分離能力強、特異性好、測定結果準確可靠等優(yōu)點。在國外己廣泛地用于食品中AFT的測定。但由于食物樣品成分復雜，在進行液相色譜分離分析前，需對樣品作*的凈化處理。常用的凈化方法是柱色譜法，該法操作繁瑣，且需使用大量有機溶劑。免疫親和柱作為AFT特異有效的分離凈化和濃縮手段，一出現(xiàn)就和液相色譜法結合用來測定糧食、飲料、尿、血及奶中的AFT。王光建等 將免疫親和柱的高度特異性和液相色譜法的高分離能力相結合，所建立的花生和玉米中AFB l 、B 2 、G 1 、G 2 的測定方法，具有雜質(zhì)干擾少、操作簡便、使用有機溶劑少、靈敏準確等優(yōu)點，整個分析操作可在15min內(nèi)完成。
4.免疫分析法 這種方法是利用免疫、酶及生化技術，開辟了AFT分析的新領域。目前應用的方法有放射免疫法、親和層析法和酶聯(lián)免疫法。（1）放射免疫法。特異性強、靈敏度高、比較準確迅速、操作簡單、易于標準化。但也有嚴重的缺點，特別是需要持殊的設備和安全保護，妨礙了更廣泛的應用。（2）親和層析法。利用免疫化學反應原理，采用大劑量的單克隆抗體，選擇性吸附提取液中的抗原物質(zhì)-AFT。由于抗原-抗體反應具有高靈敏、高選擇、高特異性等特點，從而大大提高了試樣的凈化效果及檢測靈敏度，同時可顯著減少有毒有害試劑的使用，十分有利于操作人員的健康和環(huán)境保護。張藝兵等提出了一種以免疫親和柱凈化結合熒光光度法檢測AFT的新方法，檢測低限可達10 -11 ～10 -12 g/ml。20世紀90年代起，免疫親和技術在食品分析領域得到了廣泛應用。（3）酶聯(lián)免疫法（ELISA）?；驹硎菍⒖贵w吸附于固相載體上，加入已經(jīng)用酶標記的抗原與樣品中的待測物混合物進行特異性的免疫反應，然后再加入酶的底物進行顯色反應，通過顏色的深淡來判斷樣品中待測物的（抗原）含量。酶聯(lián)免疫法大體分為兩類:—是用雙抗體夾心法檢測樣本中的AFT。如Wogan將AFB l 牛血清白蛋白涂于微滴定板池，經(jīng)初步培養(yǎng)后，加兔的APTB 1 抗體和游離APTB 1 用磷酸4—硝基苯酯作基質(zhì)。以堿性磷酸酶—抗兔免疫球蛋白檢測第—抗體的結合;二是用競爭法檢測樣本中的AFT。如在涂抗體的小孔中，用乙烷萃取的AFB l ，并與結合了辣根過氧化酶的AFTB 1 混合室溫下10min后，用水洗除去未結合的黃曲霉共軛物，加底物后在405nm檢測。ELISA法靈敏度高，比薄層法提高了近200～500倍 ［1，5］ ，特異性強，熒光物質(zhì)、色素、結構類似物對結果無干擾。而且回收率高，準確性好，提取方法簡單，測定時間僅需2h，可同時檢測幾十份樣品，提高了工效。
在線客服
